Базу собрания галереи Уффици составляют произведения искусства, которые были приобретены или заказаны членами небезызвестной семьи Медичи. К примеру, Фердинандо I в свое время купил Венеру Медичи. Это самая знаменитая статуя в коллекции скульптур, которые хранятся в этой галерее. Он также перевез сюда немалые сокровища со своей виллы в Риме. Фердинандо II также внес свой вклад, а именно хорошо пополнил коллекцию картин, которую он получил в наследство. Кардинал Леопольдо отличился тем, что создал в музее великолепную коллекцию автопортретов и рисунков художников самых разных эпох (его главным поставщиком была известная в то время Академия Святого Луки). В 1737 году, как раз после смерти последнего представителя семьи Медичи, все эти великолепные сокровища стали достоянием Флоренции. А в XVIII столетии галерея Уффици стала публичным музеем, который мог посетить любой желающий. Примерно в 1730-х г.г. группа ученых сделала подробную опись в десять томов, куда были внесены все хранящиеся здесь произведения искусства.

Первый директор в галерее появился в 1769 году. Новая администрация делала все, чтобы собрать шедевры, рассеянные по разным виллам, которые когда-то принадлежали династии Медичи.  Однажды в 1807 году музей посетила писательница мадам де Сталь, которая позже писала, что во Флоренции отношение к изящным искусствам довольно демократично.  Как известно, каждый член династии Медичи внес огромную лепту в галерею Уффици. Семейство Медичи отличалось своей мудростью, они справедливо оценивали искусство. Представители этого рода приобретали не только работы старых мастеров, но и уделяли немалое влияние современникам. Достоверно известно, что аббатства, которые имели более или менее достойные собрания коллекций, сами говорили герцогам о наличии у них шедевров, и были готовы их продать.

Кстати, Медичи покровительствовали многим художникам. Огромные коллекции самых разных работ в галерее Уффици стали причиной следующего: крупномасштабные работы, к примеру, статуи, были переданы в другие флорентийские музеи (сегодня это Барджелло и т.д.). В 2006 году в рамках расширения площади галереи были открыты дополнительные помещения, так что площадь экспозиции увеличилась почти вдвое (с 6 тыс. м2 до 13 тыс.).